Материалы и методы

Рефераты по химии / Прочносвязанные с целлюлозой полисахариды клеточной стенки ксилемы льна / Материалы и методы
Страница 1

2.1 Растительный материал

Лен (Linum usitatissimum) – лубоволокнистые культуры в которых формирование клеточных стенок проходит исключительно интенсивно, а стадии развития детально охарактеризованы (Горшкова и др., 2003;). Ксилема для анализа была взята ниже точки слома 5 см, растения собирали через месяц после посадки. Лен был выращен на открытом грунте. Ксилему от флоэмы отчищали вручную, старались максимально отчистить от флоэмы, поэтому этот процесс проводился дважды, а те участки, которые плохо поддавались отчистки просто отбрасывались.

Волокна банана.

Волокна кокоса.

2.2 Подготовка ксилемы льна к экспериментальной части

1) Фиксировали замороженную ксилему при 1000С тридцать минут.

2) Сушили 60 минут при 600С.

3) Измельчали ксилему на «мельнице».

Отчистка от непрочносвязынных пектиновых и гемицеллюлозных веществ

1) 2 гр. ксилемы заливаем 100 гр. 1% оксалата аммония.

2) Эту колбу с смесью кипятим на водяной бане 60 минут при 970С, при этом колба закрыта.

3) Охлаждаем колбу.

4) Эту смесь центрифугируем 10 мин на 4000 об/мин и сливаем надосадочную жидкость.

5) Еще раз заливаем 1% оксалатом аммония нашу смесь и кипятим на водяной бане 30 мин., также центрифугируем.

6) Вымываем оксалат аммония водой: заливаем дисцилированную воду в центрифужные стаканчики тщательно перемешиваем и центрифугируем на 4000 об/мин.

7) Так еще три раза. Проверяем рН универсальной лакмусовой бумажкой.

8) Готовим раствор 4Н КОН и 3% борной кислоты: 44,888 гр. КОН и 6 гр. Н3ВО3 на 200 мл. дисцилированной воды.

9) Заливаем 100 мл раствора к ксилеме и отстаиваем 1 час, затем центрифугируем и выливаем надосадочную жидкость.

10) Промываем водой: заливаем дисцилированную воду в центрифужные стаканчики тщательно перемешиваем и центрифугируем на 4000 об/мин. промываем до тех пор пока рН среды не будет нейтральным.

2.3 Растворение целлюлозы

Получение раствора хлорида лития в

N

,

N

– диметилацетамиде

1) N, N-диметилацетамид (ДМА) сушили над молекулярными ситами 4А.

2) В колбу присыпали 8 гр. хлорида лития и нагревали в термостате до 1800 в течение 4–5 часов, затем охлаждали и приливали 100 мл. высушенного над молекулярным ситом ДМА.

3) Колбу закрывали стеклянной пробкой и раствор перемешивали на шейкере до растворения хлорида лития (оставляли на ночь).

Выделение прочно связанных полисахаридов из растворенной целлюлозы клеточной стенки ксилемы льна

1) 1 гр. «целлюлозы» суспензировали в 10 мл. воды 40–60 мин.

2) Отделяли на воронке Шота со вставленным нейлоновым фильтром.

3) Осадок промывали на фильтре ацетоном.

4) Выдерживали в ацетоне (10 мл., 60 мин.)

5) Осадок промывали на фильтре ДМА

6) Выдерживали в ДМА (10 мл., 40–60 мин.)

7) Оставляли на ночь в свежей порции ДМА

8) На воронке шота отделяли «целлюлозу»

9) Суспензировали ее в 100 мл раствора хлорида лития в N, N – диметилацетамиде.

10) Колбу закрывали стеклянной пробкой и перемешивали до растворения целлюлозы на шейкере (1–2 дня).

11) Раствор целлюлозы по каплям добавляли к 100 мл. дисцилированной воды при перемешивание на магнитной мешалке. Раствор оставляли на ночь.

12) Отделяли выпавшую целлюлозу на воронке Шота с нейлоновым фильтром и промывали ее два – три раза дисцилированной водой (по 50 мл.) Получили Фильтрат 1

Страницы: 1 2 3

Информация о химии

Химическая революция

Больших успехов в выделении газов и изучении их свойств достиг Джозеф Пристли – протестантский священник, увлеченно занимавшийся химией. Близ Лидса (Англия), где он служил, находился пивоваренный завод, откуда можно было пол ...

Ибн Хайан, Абу Муса Джабир (Гебер)

Арабский учёный Абу Муса Джабир ибн Хайян (латинизированное имя – Гебер) родился в г. Туси, провинция Хорасан, Иран, в семье аптекаря Хайана аль Азди, происходившего из Йемена. Сведения о жизни и деятельности Джабира ибн Хай ...

Мур (Moore), Стэнфорд

Американский биохимик Стэнфорд Мур родился в Чикаго (штат Иллинойс), в семье Джона Хоуарда Мура и Рут (Фаулер) Мур. Вскоре после рождения сына родители Мура переехали в Нашвилл (штат Теннесси), где его отец преподавал право в Ванд ...