Материалы и методы

Рефераты по химии / Прочносвязанные с целлюлозой полисахариды клеточной стенки ксилемы льна / Материалы и методы
Страница 1

2.1 Растительный материал

Лен (Linum usitatissimum) – лубоволокнистые культуры в которых формирование клеточных стенок проходит исключительно интенсивно, а стадии развития детально охарактеризованы (Горшкова и др., 2003;). Ксилема для анализа была взята ниже точки слома 5 см, растения собирали через месяц после посадки. Лен был выращен на открытом грунте. Ксилему от флоэмы отчищали вручную, старались максимально отчистить от флоэмы, поэтому этот процесс проводился дважды, а те участки, которые плохо поддавались отчистки просто отбрасывались.

Волокна банана.

Волокна кокоса.

2.2 Подготовка ксилемы льна к экспериментальной части

1) Фиксировали замороженную ксилему при 1000С тридцать минут.

2) Сушили 60 минут при 600С.

3) Измельчали ксилему на «мельнице».

Отчистка от непрочносвязынных пектиновых и гемицеллюлозных веществ

1) 2 гр. ксилемы заливаем 100 гр. 1% оксалата аммония.

2) Эту колбу с смесью кипятим на водяной бане 60 минут при 970С, при этом колба закрыта.

3) Охлаждаем колбу.

4) Эту смесь центрифугируем 10 мин на 4000 об/мин и сливаем надосадочную жидкость.

5) Еще раз заливаем 1% оксалатом аммония нашу смесь и кипятим на водяной бане 30 мин., также центрифугируем.

6) Вымываем оксалат аммония водой: заливаем дисцилированную воду в центрифужные стаканчики тщательно перемешиваем и центрифугируем на 4000 об/мин.

7) Так еще три раза. Проверяем рН универсальной лакмусовой бумажкой.

8) Готовим раствор 4Н КОН и 3% борной кислоты: 44,888 гр. КОН и 6 гр. Н3ВО3 на 200 мл. дисцилированной воды.

9) Заливаем 100 мл раствора к ксилеме и отстаиваем 1 час, затем центрифугируем и выливаем надосадочную жидкость.

10) Промываем водой: заливаем дисцилированную воду в центрифужные стаканчики тщательно перемешиваем и центрифугируем на 4000 об/мин. промываем до тех пор пока рН среды не будет нейтральным.

2.3 Растворение целлюлозы

Получение раствора хлорида лития в

N

,

N

– диметилацетамиде

1) N, N-диметилацетамид (ДМА) сушили над молекулярными ситами 4А.

2) В колбу присыпали 8 гр. хлорида лития и нагревали в термостате до 1800 в течение 4–5 часов, затем охлаждали и приливали 100 мл. высушенного над молекулярным ситом ДМА.

3) Колбу закрывали стеклянной пробкой и раствор перемешивали на шейкере до растворения хлорида лития (оставляли на ночь).

Выделение прочно связанных полисахаридов из растворенной целлюлозы клеточной стенки ксилемы льна

1) 1 гр. «целлюлозы» суспензировали в 10 мл. воды 40–60 мин.

2) Отделяли на воронке Шота со вставленным нейлоновым фильтром.

3) Осадок промывали на фильтре ацетоном.

4) Выдерживали в ацетоне (10 мл., 60 мин.)

5) Осадок промывали на фильтре ДМА

6) Выдерживали в ДМА (10 мл., 40–60 мин.)

7) Оставляли на ночь в свежей порции ДМА

8) На воронке шота отделяли «целлюлозу»

9) Суспензировали ее в 100 мл раствора хлорида лития в N, N – диметилацетамиде.

10) Колбу закрывали стеклянной пробкой и перемешивали до растворения целлюлозы на шейкере (1–2 дня).

11) Раствор целлюлозы по каплям добавляли к 100 мл. дисцилированной воды при перемешивание на магнитной мешалке. Раствор оставляли на ночь.

12) Отделяли выпавшую целлюлозу на воронке Шота с нейлоновым фильтром и промывали ее два – три раза дисцилированной водой (по 50 мл.) Получили Фильтрат 1

Страницы: 1 2 3

Информация о химии

Жолио-Кюри (Joliot-Curie), Ирен

Французский физик Ирен Жолио-Кюри родилась в Париже. Она была старшей из двух дочерей Пьера Кюри и Марии Склодовской-Кюри. Мари Кюри впервые получила радий, когда Ирен был всего год. Приблизительно в это же время дед Ирен по линии ...

F — Фтор

ФТОР (лат. Fluorum), F, химический элемент с атомным номером 9, атомная масса 18,998403. Природный фтор состоит из одного стабильного нуклида 19F. Конфигурация внешнего электронного слоя 2s2p5. В соединениях проявляет только степе ...

Томсон (Thomson), Джозеф Джон

Английский физик Джозеф Джон Томсон родился в Читхэм-Хилл, пригороде Манчестера, в семье Джозефа Джеймса и Эммы (в девичестве Суинделлс) Томсон. Поскольку отец, книготорговец, хотел, чтобы мальчик стал инженером, его в возрасте че ...