Иммобилизованные соединения

Иммобилизация – это закрепление вещества на поверхности носителя (матрицы).

Методы иммобилизации:

- Физическая мобилизация представляет собой включение вещества в такую среду, в которой для него доступной является лишь ограниченная часть общего объёма. При физической иммобилизации вещество не связано с носителем ковалентными связями. Существует 4 типа связывания:

1. Адсорбция на нерастворимых носителях

2. Включение в поры геля

3. Пространственное отделение вещества от остального объёма реакционной системы с помощью полупроницаемой перегородки (мембраны)

4. Включение в двухфазную среду, где вещество растворимо и может находиться только в одной из фаз

Адсорбционная иммобилизация является наиболее старым из существующих способов иммобилизации. Этот способ достаточно прост и достигается при контакте водного раствора фермента с носителем. После отмывки неадсорбированного вещества иммобилизованное соединение готово к использованию. Удерживание адсорбированной молекулы на поверхности носителя может обеспечиваться за счет неспецифических Ван-дер-ваальсовых взаимодействий, водородных связей, электростатических и гидрофобных взаимодействий между носителем и поверхностными группами вещества. Вклад каждого из типов связывания зависит от природы носителя и функциональных групп на поверхности. Взаимодействия с носителем могут быть настолько сильными, что адсорбция может сопровождаться разрушением структуры. Преимуществом метода адсорбционной иммобилизации является доступность и дешевизна сорбентов, выступающих в качестве носителей.

Суть метода гелевой иммобилизации состоит в том, что молекулы включаются в трёхмерную сетку из тесно переплетённых полимерных цепей, образующих гель. Среднее расстояние между соседними цепями в геле меньше размера молекулы включенного соединения, поэтому оно не может покинуть полимерную матрицу и выйти в окружающий раствор, т. е. находится в иммобилизованном состоянии. Дополнительный вклад в удерживание соединения в сетке геля могут вносить также ионные и водородные связи между молекулами вещества и полимерными цепями. Пространство между полимерными цепями в геле заполнено водой, на долю которой приходится значительная часть всего объёма геля. Для иммобилизации соединений в геле существует два основных способа. При одном из них вещество помещают в водный раствор мономера, затем проводят полимеризацию, в результате чего образуется полимерный гель с включенными в него молекулами соединения. В реакционную смесь также добавляют сшивающие агенты, которые придают полимеру структуру трёхмерной сетки. В другом случае вещество вносят в раствор готового полимера, который переводят в гелевое состояние. Способ иммобилизации путем включения в полимерный гель обеспечивает равномерное распределение вещества в объёме носителя.

Общий принцип иммобилизации с использованием мембран заключается в том, что водный раствор соединения отделяется от водного раствора субстрата полупроницаемой перегородкой. Такая мембрана легко пропускает небольшие молекулы субстрата, но непреодолима для больших молекул вещества. Модификации этого метода различаются лишь способами получения полупроницаемой мембраны и её природой.