Эксперементальная часть

Исследование воздействия внешних факторов на амилазу слюны1. Специфичность амилазы слюныМетодика приготовления разбавленной слюны:Прополоскать рот два раза дистиллированной водой для удаления остатков пищи. Взять в рот 20 мл. дистиллированной воды, держать её во рту около двух минут. полученную жидкость слить в стакан или колбу. Жидкость представляет собой раствор слюны, содержащий амилазу-фермент.Ход работы:В 2 пробирки добавить по 20 капель раствора крахмала, в 3-ю- 20 капель раствора сахарозы.В первую пробирку налить 10 капель дистиллированной воды, во вторую и в третью пробирки добавить по 10 капель разведенной слюны. Содержимое пробирок перемешать встряхиванием и поместить пробирки в водяную баню с температурой 37-40’ С. Через пять минут пробы разделить пополам и проделать реакции с йодом (для чего добавить в каждую пробирку по 1 капле раствора йода в йодистом калии) и с фелинговой жидкостью (добавить по 5 капель фелинговой жидкости).Результаты отражены в таблице 1 Таблица 1

№ пробирки	Субстрат	фермент	Реакция с йодом		Реакция с Фелинговой жидкостью
			До	После
1	крахмал		бесцветный.	Сине-фиолетовое окрашивание (со временем исчезает)	-
2	крахмал	амилаза		Бесцветный	-
3	сахароза	амилаза	бесцветный	Голубой оттенок (со временем не исчезает)	-

Реакция гидролиза крахмала на субстрате с участием фермента амилаза прошла, о чем свидетельствует положительная проба с Фелинговой жидкостью, и отрицательная с реактивом Люголя. Амилаза катализирует гидролиз крахмала, сахароза не катализирует гидролиз крахмала. Реакция гидролиза крахмала с участием амилазы

Обнаружение продуктов гидролиза крахмала

Реакция с жидкостью Фелинга:

Реакция с реактивом Люголя:

2.Влияние ингибиторов и активаторов на активность амилазы.

Ход работы:

В 3 пробирки налить по 5-10 капель разведенной слюны. В первую пробирку добавляют 1 каплю хлористого натрия (NaCl), во вторую -1каплю раствора сернокислой меди (CuSO4), в третью – 1 капли воды. Затем в каждую пробирку прилить по 5 капель раствора крахмала. Все три пробирки на 2-3 минуты поместить в водяную баню при температуре 37-40 С. Добавит в каждую пробирку по 1 капле раствора йода в йодистом калии. Результаты отражены в таблице 2 Таблица 2

№ пробирки	Фермент	Эффектор	Субстрат	Реакция с йодом	наблюдения
1	Амилаза	NaCl	Крахмал	Синие окрашивание	Прозрачн.
2	Амилаза	CuSO4	Крахмал	Синие окрашивание	Синие окрашивание
3	Амилаза	Н2О	Крахмал	Синие окрашивание	Бледно-голубое окрашивание

Вывод: Ионы Cl активирует амилазу, ионы Сu – ингибиторы для всех ферментов, т.к. типичный металл вызывает денатурацию белка. То есть по скорости обесцвечивания крахмала с реактивом Люголя, NaCl является активатором, а CuSO4 –ингибитором.